260/280、260/230 含義

weixin_34138377發表於2018-06-24

  1. A260nm
    是核酸最高吸收峰的吸收波長，最佳測量值的範圍為0.1至1.0。如果不在此範圍，稀釋或濃縮樣品，使之在此範圍內；如果吸光度小於0.05，檢查是否存 在操作因素（如移液不準確，樣品內有懸浮物等）影響。DNA樣品的A260 吸光度值是否>0.1。（請注意，這個值跟儀器無關，核酸的吸光度必需大於0.1，其值才有效和可靠，因為樣品中的雜質和顆粒這些不純物的干擾通常 會對光有一定吸收，其值<0.1）；

  2. A280nm, A270nm
    是蛋白最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純RNA為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質的汙染，需要純化樣品。比值=1.5相當於50％蛋白質/DNA溶液.酚的最大吸收峰在270nm。

  3. A230nm
    是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長，比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA和 RNA的A260/A230比值為2.5。若比值小於2.0標明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑汙染，需要純化樣品。A230產生負值主要是由 於在很低DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負值會被校正。

4. A320nm或A340nm
為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是，標明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A320一般是 0。

5. A260/A280和A260/A230
是核酸純度的指示值。純度好的DNA或RNA，在pH7-8.5 下A260 / A280的比值應該在2.0 或2.5。 純淨的樣品比值大於1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低於1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些汙染物，如碳水化合物、鹽（胍鹽）等，較純淨的核酸A260/A230的比值 大於2.0 。

當 0.5％BSA蛋白質汙染時，蛋白汙染會導致260和280的數值都下降，其淨結果是260/280比值下降，但260/280的比值變化並不顯著，正如 分子克隆3所說。但蛋白殘留會導致230的數值顯著上升，顯著影響260/230的比值。也就是說，如果RNA樣品的260/280＝1.7，260 /230＝0.5，那麼就應該考慮汙染原因不是胍鹽殘留，而是蛋白殘留.

酚的最大吸收峰在270。酚的殘留會顯著的增加230、260和280的數值，同時酚的吸收峰與核酸的吸收峰合併後，最大吸收峰向270方向偏移， 也就是說最大吸收峰在270附近。也就是說，如果RNA樣品的260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5，那麼汙染原因就應該考慮是酚殘留。

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