（線上）設計引物

方法一、通過primer bank

1、輸入需要設計引物的基因或者序列（here），選擇相應的基因名型別以及物種名，然後點選submit

---

2、儘量選擇含有Validation Results的引物選項（有實驗驗證），Tm值在60左右

點開Validation Results檢視實驗結果，圖示單峰值可用於後續驗證，多峰值則無法使用！！！

---

3、合適的序列然後在NCBI中進行blast-->Nucleotide

把一條引物序列輸入後,檢視是否有選項需要改變，然後blast

檢視有沒有想要的基因以及對應的E value 小於等於0.54，若有則可以合成試試能不能用^-^!

---

---

方法2、在NCBI中查詢相關基因

1、輸入相應基因

找到下圖中，點選NM_****

點選Pick Primers

檢視Tm在60左右，GC%在50多，self3’ complementarity最好是0,0（越小越好）

然後對獲得的引物進行blast，觀察對應的產物以及E value

-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------

最直接查詢引物的方式就是在NCBI中查詢有沒有含有相關基因引物序列的文章